1) Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия;
2) Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия;
3) Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера,
Санкт-Петербург, Россия;
4) Клинический госпиталь ФКУЗ Медико-санитарная часть МВД России по г. Санкт-Петербургу и Ленинградской области, Санкт-Петербург, Россия
Цель исследования: оценить антихеликобактерное действие некоторых пробиотиков in vitro и in vivo. Материал и мето-
ды. Было использовано 3 пробиотика: 1-й – Enterococcus faecium штамм L-3, 2-й – Bacillus subtilis, 3-й – комбинация Bifido-
bacterium longum и Enterococcus faecium. In vitro проведена оценка роста 14 штаммов H. pylori на фоне добавления про-
биотиков. Исследуемые пробиотики разводились в дистиллированной воде в соотношении 1:100 и затем добавлялись
в чашку с агаром, на который высевался штамм H. pylori. Учет роста осуществлен на 6–7-е сутки. Пятьдесят пять больных
H. pylori-ассоциированным хроническим гастритом были разделены на 3 группы: 1-я получала B. subtilis; 2-я – E. faecium,
3-я – стандартную тройную эрадикационную терапию (омепразол, амоксициллин, кларитромицин 7 дней). Результаты. Инги-
бирование роста H. pylori имело место в 50% случаев при контакте с пробиотиком на основе B. subtilis, в 78,6% случаев
при контакте с Enterococcus faecium strain L-3, в 64% случаев при контакте с комбинацией B. longum и E. faecium. Эффективность эрадикации (in vivo) составила 39%, 41 и 60% в 1-й, 2-й и 3-й группах соответственно. Заключение. Полученные результаты могут объясняться прямым антагонистическим действием пробиотиков в отношении H. pylori, возможно, за счет выработки бактериоцинов. Данная гипотеза нуждается в дальнейшем углубленном изучении.
пробиотики
Enterococcus faecium
Helicobacter pylori
бактериоцины
эрадикация
Введение
Возможным путем повышения эффективности эрадикации Helicobacter pylori и оптимизации лечения H. pylori-ассоциированных заболеваний является применение пробиотиков. Препараты с пробиотическим действием кроме коррекции дисбиотических изменений кишечной микрофлоры обеспечивают ряд дополнительных положительных эффектов, например иммунологических (улучшение показателей гуморального и клеточного иммунитета, снижение аллергизации организма), а также оказывают воздействие на H. pylori в желудке за счет прямого антагонистического влияния и стимуляции местной иммунологической защиты (укрепление слизистого защитного барьера и снижение выраженности воспаления слизистой оболочки желудка, выработка бактериоцинов) [1–3].
В ряде работ показано, что применение пробиотиков (на основе бифидобактерий, лактобацилл, культуры сенной палочки и др.) в отношении больных заболеваниями, ассоциированными с H. pylori, способствует улучшению состояния микрофлоры кишечника, снижению риска развития побочных эффектов антибактериальной терапии, в т.ч. антибиотикоассоциированной диареи, способствует наступлению более быстрой клинико-эндоскопической ремиссии заболевания и повышению эффективности эрадикации H. pylori [4–8].
В постулатах IV и V Маастрихтских консенсусов упоминается о возможной эффективности некоторых пробиотиков в качестве дополнения к стандартной эрадикационной терапии [9, 10].
Исследования, посвященные роли пробиотиков в эрадикации H. pylori, движутся по двум направлениям.
В первом случае пробиотики включают в состав стандартной эрадикационной терапии [11–13]. Второе направление изучает влияние монотерапии пробиотиками на эффективность антихеликобактерной терапии [14–18]. Важным аспектом является также подтверждение антагонистических свойств пробиотиков in vitro для более четкого понимания процессов взаимодействия пробиотических штаммов с H. pylori. Предлагается схема основных механизмов положительного влияния пробиотиков (средств коррекции нарушений микробиоценоза кишечника) на эффективность эрадикации Helicobacter pylori (рис. 1) [19–21].
Цель работы: изучить влияние некоторых пробиотиков на рост инфекции H. pylori in vitro, оценка эффективности эрадикации при использовании монотерапии пробиотиками in vivo.
Материал и методы
Исследование in vitro
Были успешно культивированы 14 штаммов H. pylori. Штаммы микроорганизма были получены при проведении бактериологического анализа биоптатов слизистой оболочки антрального отдела желудка пациентов с клиническими проявлениями диспепсии. Инкубирование проведено в стандартных условиях для роста H. pylori. Оценивалось действие трех различных пробиотиков: 1-й – на основе Enterococcus faecium strain L-3, 2-й – на основе лиофилизированной культуральной жидкости Bacillus subtilis, 3-й – на основе комбинации Bifidobacterium longum и E. faecium. Исследуемые пробиотики разводились в дистиллированной воде в соотношении 1:100 и затем добавлялись в чашку с агаром, на который высевался штамм H. pylori. Учет роста осуществлен на 6–7-е сутки.
Исследование in vivo
Под наблюдением находились 55 больных хроническим гастродуоденитом, ассоциированным с H. pylori.
В зависимости от получаемой терапии пациенты были разделены на 3 группы. 1-я группа (18 больных) получала пробиотик на основе B. subtilis, 2 капсулы 2 раза в сутки во время еды 20 дней (согласно схеме назначения в инструкции); 2-я группа (17 пациентов) – пробиотик на основе E. faecium, 3 драже 3 раза в сутки во время еды в течение 1 месяца (согласно схеме назначения в инструкции), 3-я группа (20 больных – группа сравнения) – стандартную тройную эрадикационную терапию (омепразол 20 мг 2 раза в сутки, амоксициллин 1000 мг 2 раза в сутки, кларитромицин 500 мг 2 раза в сутки 7 дней). В 1-ю и 2-ю группы вошли пациенты, у которых имела место аллергическая реакция на кларитромицин или амоксициллин и/или которые отказались от проведения тройной эрадикационной терапии. До и после лечения (через 1,5–2,0 месяца) проведен стандартизированный опрос всех больных для оценки характера жалоб, фиброэзофагогастродуоденоскопия с взятием двух биоптатов из антрального отдела желудка для верификации инфекции H. pylori (проведены быстрый уреазный тест, гистологическое исследование биоптатов, полимеразная цепная реакция с детекцией гена ureC). Статистическая обработка данных осуществлена с помощью программы Excel для Windows.
Результаты и обсуждение
Исследование in vitro
Ингибирование роста H. pylori имело место в 50% случаев при контакте культуры микроорганизма с пробиотиком на основе B. subtilis, в 78,6% случаев при контакте с пробиотиком на основе E. faecium strain L-3 и в 64% случаев при контакте с пробиотиком на основе B. longum и E. faecium (см. таблицу).
Из представленной таблицы видно, что ингибирование роста H. pylori при контакте со всеми тремя выбранными пробиотиками произошло лишь у 35,7% штаммов данного микроорганизма. Ингибирование роста 35,7% штаммов микроорганизма было отмечено в присутствии каких-либо двух из трех пробиотиков. В 14,3% случаев ингибирование роста H. pylori определено в присутствии только какого-то одного пробиотика. Это может говорить о различной реакции штаммов возбудителя на разные пробиотики и требует дальнейшего изучения.
Исследование in vivo
Пробиотики в качестве монотерапии H. pylori-ассоциированного гастрита показали свою эффективность (рис. 2) и безопасность. Пациенты отмечали хорошую переносимость пробиотических препаратов, побочных эффектов на фоне их приема выявлено не было.
Заключение
Результаты, полученные in vitro, могут быть следствием прямого ингибирующего (антагонистического) действия пробиотиков (возможно, за счет синтеза бактериоцинов) в отношении H. pylori. Однако данная гипотеза нуждается в дальнейшем углубленном изучении. Использование монотерапии пробиотиками обеспечивает достижение уровня успешной эрадикации H. pylori (39 и 41%), достоверно превышающего процент спонтанной эрадикации (3–5%). Лучшие показатели ингибирования H. pylori продемонстрировал пробиотический штамм E. faecium strain L-3 in vitro и in vivo. Следовательно, возможно проведение дальнейших исследований именно с этим пробиотиком. В целом монотерапия пробиотиками может быть рекомендована как альтернативный способ лечения хронического гастродуоденита, ассоциированного с H. pylori, в особенности при непереносимости компонентов стандартной антихеликобактерной терапии.
1. Ткаченко Е.И., Авалуева Е.Б., Успенский Ю.П., Волков М.Ю., Сказываева Е.В., Можелис Ю.В., Захарченко М.М. Эрадикационная терапия, включающая пробиотики: консенсус эффективности и безопасности. Клиническое питание. 2005;1:14–20.
2. Суворов А.Н. Симаненков В.И. H. рylori как возбудитель заболеваний желудочно-кишечного тракта. Генетика патогенности. Возможность эрадикации с использованием пробиотиков (лекции для врачей). СПб., 2006. 12 с.
3. Gotteland M., Brunser O., Cruchet S. Systematic review: are probiotics useful in controlling gastric colonization by Helicobacter pylori? Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 2006;23(8):1077–86.
4. Суворов А.Н.. Алехина Г.Г. Драже «Ламинолакт» – эффективное средство для нормализации микробиоценоза кишечника. Гастробюллетень. 2001;1:24.
5. Барышникова Н.В. Эффективность пробиотической терапии в коррекции нарушений микробиоценоза кишечника у больных хроническим гастродуоденитом, ассоциированным с Helicobacter pylori. Вестник СПб., 2006;2:89–92.
6. Caramia G. Probiotics from Mechnicoff to the current preventive and therapeutics possibilities. La Pediatria medica e chirurgica: Medical and Surgical Pediatrics. 2004;26(1):19–33.
7. Limdi J.K., O’neill C., McLaughlin J. Do probiotics have a therapeutic role in gastroenterology? World J. Gastroenterol. 2006;12(34):5447–57.
8. Szajewska H., Horvath A., Piwowarczyk A. Meta-analysis: the effects of Saccharomyces boulardii supplementation on Helicobacter pylori eradication rates and side effects during treatment. Aliment. Pharmacol. Ther. 2010;32:1069–79.
9. Malfertheiner P., Megraud F., O’Morain C.A., Atherton J., Axon A.T., Bazzoli F., Gensini G.F., Gisbert J.P., Graham D.Y., Rokkas T., El-Omar E.M., Kuipers E.J. European Helicobacter Study Group Management of Helicobacter pylori infection: the Maastricht IV/Florence Consensus Report. Gut. 2012;61:646–64.
10. Malfertheiner P., Megraud F., O’Morain C.A., Gisbert J.P., Kuipers E.J., Axon A.T., Bazzoli F., Gasbarrini A., Atherton J., Graham D.Y., Hunt R., Moayyedi P., Rokkas T., Rugge M., Selgrad M., Suerbaum S., Sugano K., El-Omar E.M. et al. Management of Helicobacter pylori infection – the Maastricht V/Florence Consensus Report. Gut. 2017;66:6–30.
11. Ткаченко Е.И., Успенский Ю.П., Барышникова Н.В. Оптимизация лечения заболеваний, ассоциированных с Helicobacter pylori. Врач. 2012;1:36–8.
12. Rustamov M.N., Lazebnik L.B. Use of probiotics in the treatment of patients with Helicobacter pylori-positive duodenal ulcer. Научно-практические аспекты кардиологии и внутренних болезней. Минск, 2013. С. 298–301.
13. Rustamov M.N., Lazebnik L.B. Effect of nonpharmacologic factors in treatment of patients with Helicobacter pylori – associated duodenal ulcer. Central Asia Gastroenterology Week-2013. Consilium. 2013. 84 р.
14. Козлова Д.И. Состояние кишечного микробиоценоза и течение H. pylori-ассоциированного гастрита в условиях эрадикационной и синбиотической терапии. Дисс. канд. мед. наук. СПб., 2004.
15. Барышникова Н.В. Монотерапия пробиотиками как альтернатива стандартной эрадикационной терапии больных Helicobacter pylori-ассоциированными заболеваниями. Сборник научных материалов V конгресса «Рациональная фармакотерапия и клиническая фармакология». СПб., 2010. С. 27–32.
16. Canducci F., Cremonini F., Armuzzi A. Probiotics and Helicobacter pylori eradication // Digestive and Liver Diseases: official journal of the Italian Society of Gastroenterology and the Italian Association for the Study of the Liver. 2002;34(Suppl. 2):81–3.
17. Plewinska E.M., Bak-Romaniszynh L., Czkwianianc E., Planeta-Malecka I. Bifidogenic properties of the probiotic bacteria in eradication Helicobacter pylori infection in children / Abstracts of World congress of gastroenterology. Montréal, Canada. 2005.
18. Vandenplas Y., Czerucha D, Surawicz C. Diarrhea: Treatment and prevention. Where do probiotics fit? Abstracts of World congress of gastroenterology. Montréal, Canada. 2005.
19. Успенский Ю.П., Барышникова Н.В., Фоминых Ю.А. Лечение инфекции Helicobacter pylori: проблемы и перспективы. Consilium Medicum. Гастроэнтерология. (Прил.). 2015;1:8–17.
20. Успенский Ю.П., Фоминых Ю.А., Иванов С.В., Менакер И.О. Эволюция в эрадикационной терапии НР-ассоциированных заболеваний. Выход за рамки стандартов? РМЖ. 2016;24(17):1144–52.
21. Успенский Ю.П.. Суворов А.Н., Барышникова Н.В. Инфекция Helicobacter pylori в клинической практике. СПб., 2011. С. 497–537.
Автор для связи: Н.В. Барышникова – к.м.н., Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Минздрава России; Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, Россия; e-mail:
baryshnikova_nv@mail.ru
