Лечение бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с множественными неудачными попытками путем сокультивирования эмбрионов с аутологичными внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости

DOI

https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.85

Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Непша О.С., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А.
ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Актуальность: Основная задача лечения бесплодия методами ВРТ – увеличение процента имплантации эмбриона и рождение здорового ребенка. Научные поиски направлены на улучшение условий культивирования, в частности, на возможности сокультивирования эмбрионов разных стадий развития с соматическими клетками и внеклеточными везикулами (ВВ). Экспериментальные модели на животных показали, что добавление ВВ фолликулярной жидкости (ФЖ) в течение in vitro культивирования модулирует развитие эмбриона, улучшает показатели имплантации. ВВ ФЖ были выбраны еще и потому, что доказана их роль в регуляции качества ооцита и последующего постимплантационного развития эмбриона.
Цель: Оценить клиническую эффективность оптимизации эмбриологического этапа программ лечения бесплодия методами ВРТ с помощью сокультивирования ВВ ФЖ с эмбрионами у пациенток с множественными неудачными попытками экстракорпорального оплодотворения.
Материалы и методы: В исследовании принимали участие супружеские пары с более 2 неудачными попытками ЭКО в анамензе, нормальным каритипом и невыраженной патозооспермией. Всего было обследовано 76 женщин. В рамках стандартного протокола ВРТ в день трансвагинальной пункции была забрана ФЖ, из которой методом последовательного ультрацентрифугирования были выделены ВВ. Ооциты после оплодотворения были поделены на две группы случайным образом: группа 1 – сокультивирование зигот с ВВ ФЖ в течение 24 ч, группа 2 – классическое культивирование. Добавление ВВ ФЖ осуществляли по следующей схеме. В лунку 4-луночного планшета с 0,3 мл культуральной среды и ооцитами после ИКСИ добавляли 2 мкл среды с ВВ ФЖ и оставляли на 24 ч. На 1-й день культивирования эмбрионы на стадии зиготы группы 1 были перенесены в классическую культуральную среду, где продолжили свое развитие до стадии бластоцисты. Проводили оценку эмбриологических и клинических результатов. Конечной точкой служила частота наступления беременности после переноса одного эмбриона в полость матки. Статистический уровень значимости принимали p<0,05.
Результаты: При оценке параметров раннего эмбриогенеза выявлено, что частота оплодотворения была статистически значимо выше в группе при сокультивировании ооцитов с ВВ ФЖ – 88,1% против 77,3% (р<0,001, тест хи-квадрат). Также в группе 1 была значимо выше частота формирования бластоцист отличного и хорошего качества – 55,0% против 42,6% (р<0,01). При сокультивировании оплодотворенных ооцитов после ИКСИ с ВВ ФЖ значимо больше вырастает бластоцист, пригодных для переноса в полость матки и криоконсервации: 1 [0; 1,25] в группе 1 и 0 [0; 1] в группе 2. При анализе клинических данных выявлено, что частота наступления беременности эмбрионами из группы 2 составила 27,2%, в группе 1 (ВВ ФЖ) клиническую беременность диагностировали у 14 женщин из 45 переносов, биохимическую – у двух. Частота наступления клинической беременности в группе 1 составила 31,1%. Как видно из представленных данных, статистически значимой разницы по клиническим показателям обнаружено не было в общей когорте набранных женщин с множественными неудачными попытками ЭКО в анамнезе. При анализе клинических исходов обратила на себя внимание тенденция к увеличению частоты наступления беременности при сокультивировании ВВ ФЖ у более молодых женщин и практически полное отсутствие положительного исхода у пациенток позднего репродуктивного возраста.
Заключение: Согласно полученным результатам, можно говорить о том, что сокультивирование с ВВ ФЖ у женщин с множественными неудачными попытками ВРТ в анамнезе позволяет существенно улучшить эмбриологический этап программы лечения бесплодия. Для получения статистически значимой разницы по клиническим исходам требуются дальнейшие исследования.

Вклад авторов: Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Макарова Н.П. – концепция и дизайн исследования; Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Макарова Н.П., Кулакова Е.В. – написание и редактирование текста; Ахмедова З.Ф., Непша О.С., Гаврилов М.Ю. – статистическая обработка результатов; Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Зингеренко Б.В. – сбор биологического материала; Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н. – лабораторный этап; Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А. – утверждение публикации.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Финансирование: Работа выполнена в рамках инициативного научного проекта «Изучение влияния внеклеточных везикул биологических жидкостей репродуктивных органов и тканей на гаметы, процесс оплодотворения и раннего эмбриогенеза человека и имплантации» (2025–2027, руководитель Макарова Н.П.) ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» МЗ РФ.
Одобрение этического комитета: Исследование было поддержано на заседании Комиссии по биоэтике ФБГУ «НМИЦ АГП им. В.И.Кулакова» Минздрава России (протокол №10 от 20 октября 2022 г.).
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Непша О.С., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А. Лечение бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий у женщин с множественными неудачными попытками путем сокультивирования эмбрионов с аутологичными внеклеточными везикулами фолликулярной жидкости.
Акушерство и гинекология. 2025; 5: 66-77
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2025.85

ВРТ

бесплодие

сокультивирование

фолликулярная жидкость

внеклеточные везикулы

ЭКО

эмбрион

Полный текст статьи
доступен в "Библиотеке Врача"

Назаренко Т.А., ред. Бесплодный брак: клинические задачи и их решение. Пособие для врачей. М.: МЕДпресс-информ; 2024. 144 с.
Shingshetty L., Cameron N.J., Mclernon D.J., Bhattacharya S. Predictors of success after in vitro fertilization. Fertil. Steril. 2024; 121(5): 742-51. https://dx.doi.org/10.1016/j.fertnstert.2024.03.003
Wu C., Cai H., Pu Q., Yu L., Goswami A., Mo Z. Investigating the role of oviductal mucosa-endometrial co-culture in modulating factors relevant to embryo implantation. Open Med. (Wars.). 2024; 19(1): 20241077. https://dx.doi.org/10.1515/med-2024-1077
Lorenzo M.S., Teplitz G.M., Luchetti C.G., Cruzans P.R., Bertonazzi A., Lombardo D.M. The coculture of in vitro produced porcine embryos and oviductal epithelial cells improves blastocyst formation and modify embryo quality. Theriogenology. 2024; 226: 141-50. https://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2024.06.007
Le Saint C., Crespo K., Bourdiec A., Bissonnette F., Buzaglo K., Couturier B. et al. Autologous endometrial cell co-culture improves human embryo development to high-quality blastocysts: a randomized controlled trial. Reprod. Biomed. Online. 2019; 38(3): 321-9. https://dx.doi.org/10.1016/j.rbmo.2018.12.039
Carles M., Lefranc E., Bosquet D., Capelle S., Scheffler F., Copin H. et al. In vitro maturation of oocytes from stimulated IVF-ICSI cycles using autologous cumulus cell co-culture: A preliminary study. Morphologie. 2023; 107(356): 28-37. https://dx.doi.org/10.1016/j.morpho.2022.02.002
Асфарова Г.Р., Смольникова В.Ю., Макарова Н.П., Бобров М.Ю., Эльдаров Ч.М., Зингеренко Б.В., Калинина Е.А. Клинические и молекулярные аспекты аутологичного сокультивирования эмбрионов с клетками кумулюса в программах экстракорпорального оплодотворения. Акушерство и гинекология. 2023; 4: 97-110.
da Silveira J.C., Andrade G.M., Del Collado M., Sampaio R.V., Sangalli J.R., Silva L.A. et al. Supplementation with small-extracellular vesicles from ovarian follicular fluid during in vitro production modulates bovine embryo development. PLoS One. 2017; 12(6): e0179451. https://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0179451
Довгань А.А., Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Зингеренко Б.В., Романов Е.А., Силачев Д.Н., Макарова Н.П., Калинина Е.А. Внеклеточные везикулы фолликулярной жидкости: клинические аспекты и молекулярная биология. Акушерство и гинекология. 2023; 6: 38-43.
Duval C., Wyse B.A., Tsang B.K., Librach C.L. Extracellular vesicles and their content in the context of polycystic ovarian syndrome and endometriosis: a review. J. Ovarian. Res. 2024; 17(1): 160. https://dx.doi.org/10.1186/s13048-024-01480-7
Aoki S., Inoue Y., Hara S., Itou J., Shirasuna K., Iwata H. microRNAs associated with the quality of follicular fluids affect oocyte and early embryonic development. Reprod. Med. Biol. 2024; 23(1): e12559. https://dx.doi.org/10.1002/rmb2.12559.
Nepsha O.S., Burmenskaya O.V., Akhmedova Z.F., Romanov E.A., Sysoeva A.P., Goryunov K.V. et al. Changes in the transcription of proliferation- and apoptosis-related genes in embryos in women of different ages under the influence of extracellular vesicles from donor follicular fluid in vitro. Bull. Exp. Biol. Med. 2024; 176(5): 658-65. https://dx.doi.org/10.1007/s10517-024-06087-y
Российская Ассоциация Репродукции Человека. Секция «Клиническая эмбриология». Оценка ооцитов и эмбрионов в лаборатории ВРТ. Методические рекомендации. 2021.
Sallem A., Santulli P., Barraud-Lange V., Le Foll N., Ferreux L., Maignien C. et al. Extended culture of poor-quality supernumerary embryos improves ART outcomes. J. Assist. Reprod. Genet. 2018; 35(2): 311-9. https://dx.doi.org/10.1007/s10815-017-1063-7
Gabryś J., Gurgul A., Szmatoła T., Kij-Mitka B., Andronowska A., Karnas E. et al. Follicular fluid-derived extracellular vesicles influence on in vitro maturation of equine oocyte: impact on cumulus cell viability, expansion and transcriptome. Int. J. Mol. Sci. 2024; 25(6): 3262. https://dx.doi.org/10.3390/ijms25063262
Soares M., Pinto M.M., Nobre R.J., de Almeida L.P., da Graça Rasteiro M., Almeida-Santos T. et al. Isolation of extracellular vesicles from human follicular fluid: size-exclusion chromatography versus ultracentrifugation. Biomolecules. 2023; 13(2): 278. https://dx.doi.org/10.3390/biom13020278
Neyroud A.S., Chiechio R.M., Moulin G., Ducarre S., Heichette C., Dupont A. et al. Diversity of extracellular vesicles in human follicular fluid: morphological analysis and quantification. Int. J. Mol. Sci. 2022; 23(19): 11676. https://dx.doi.org/10.3390/ijms231911676
Simon C., Greening D.W., Bolumar D., Balaguer N., Salamonsen L.A., Vilella F. Extracellular vesicles in human reproduction in health and disease. Endocr. Rev. 2018; 39(3): 292-32. https://dx.doi.org/10.1210/er.2017-00229
Andronico F., Battaglia R., Ragusa M., Barbagallo D., Purrello M., Di Pietro C. Extracellular vesicles in human oogenesis and implantation. Int. J. Mol. Sci. 2019; 20(9): 2162. https://dx.doi.org/10.3390/ijms20092162
Зингеренко Б.В., Бурменская О.В., Сысоева А.П., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Макарова Н.П., Калинина Е.А. Изменение транскрипции генов в клетках кумулюса возрастных женщин под действием внеклеточных везикул фолликулярной жидкости молодых доноров. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2024; 178(12): 767-73.
Fan W., Qi Y., Wang Y., Yan H., Li X., Zhang Y. Messenger roles of extracellular vesicles during fertilization of gametes, development and implantation: Recent advances. Front. Cell Dev. Biol. 2023; 10: 1079387. https://dx.doi.org/10.3389/fcell.2022.1079387
Назаренко Т.А. Стимуляция функции яичников. 7-е изд. М.: МЕДпресс-информ; 2023. 268 с.
Sysoeva A., Akhmedova Z., Nepsha O., Makarova N., Silachev D., Shevtsova Y. et al. Characteristics of the follicular fluid extracellular vesicle molecular profile in women in different age groups in ART programs. Life (Basel). 2024; 14(5): 541. https://dx.doi.org/10.3390/life14050541
Battaglia R., Musumeci P., Ragusa M., Barbagallo D., Scalia M., Zimbone M. et al. Ovarian aging increases small extracellular vesicle CD81+ release in human follicular fluid and influences miRNA profiles. Aging (Albany NY). 2020; 12(12): 12324-41. https://dx.doi.org/10.18632/aging.103441
Zhang H., Lin S., McElroy C.L., Wang B., Jin D., Uteshev V.V. et al. Circulating pro-inflammatory exosomes worsen stroke outcomes in aging. Circ. Res. 2021; 129(7): e121-e140. https://dx.doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.121.318897
Gu Y., Zhang X., Wang R., Wei Y., Peng H., Wang K. et al. Metabolomic profiling of exosomes reveals age-related changes in ovarian follicular fluid. Eur. J. Med. Res. 2024; 29(1): 4. https://dx.doi.org/10.1186/s40001-023-01586-6

Поступила 25.03.2025

Принята в печать 21.04.2025

Ахмедова Зумрият Фахрудиновна, аспирант отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии, перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4,
zyuka-1997@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-4483-8820
Сысоева Анастасия Павловна, к.б.н., эмбриолог отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4,
sysoeva.a.p@gmail.com, https://orcid.org/0000-0002-6502-4498
Гаврилов Максим Юрьевич, м.н.с. отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4, maxgavr67@gmail.com,
https://orcid.org/0000-0001-6189-0287
Зингеренко Борис Владимирович, эмбриолог отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4,
b_zingerenko@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0002-8784-5502
Шевцова Юлия Александровна, м.н.с. лаборатории клеточных технологий, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4, u_shevtsova@oparina4.ru
Силачев Денис Николаевич, д.б.н., руководитель лаборатории клеточных технологий, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4, d_silachev@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0003-0581-9755
Непша Оксана Сергеевна, к.б.н., н.с. отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4,
o_nepsha@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0002-9988-2810
Макарова Наталья Петровна, д.б.н., в.н.с. отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4,
np_makarova@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0003-1396-7272
Кулакова Елена Владимировна, д.м.н., с.н.с. отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ, 117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4, e_kulakova@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0002-4433-4163
Калинина Елена Анатольевна, д.м.н, профессор, заведующая отделением вспомогательных технологий в лечении бесплодия им. проф. Б.В. Леонова, Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова МЗ РФ,
117997, Россия, Москва, ул. Акад. Опарина, д. 4, e_kalinina@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0002-8922-2878

Ахмедова З.Ф., Сысоева А.П., Гаврилов М.Ю., Зингеренко Б.В., Шевцова Ю.А., Силачев Д.Н., Непша О.С., Макарова Н.П., Кулакова Е.В., Калинина Е.А.

Ключевые слова

Список литературы

Об авторах / Для корреспонденции

Также по теме