ISSN 2073–4034
eISSN 2414–9128

Показатели эндотелиальной дисфункции у детей с гемолитико-уремическим синдромом

Макарова Т.П., Давлиева Л.А., Мельникова Ю.С., Хуснутдинова Д.Р.

1) Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия; 2) Детская республиканская клиническая больница, Казань, Россия
Обоснование. Гемолитико-уремический синдром (ГУС) является одной из важных причин острого повреждения почек (ОПП) у детей. Анализ литературных данных демонстрирует центральную роль эндотелиальной дисфункции (ЭД) в многочисленных патофизиологических процессах, в т.ч. и при патологии почек. В данной статье рассматриваются показатели ЭД (эндотелин-1 [ЭТ-1]и оксид азота [NO]) в сыворотке крови детей с ГУС. Цель исследования: определение клинико-диагностического и прогностического значения ЭТ-1 и NO в сыворотке крови детей с ГУС. Методы. Исследование выполнено в два этапа. На первом этапе исследования проведен ретроспективный анализ 89 историй болезни детей с типичной формой ГУС (stec-ГУС) в возрасте от 3 месяцев до 17 лет. Второй этап включил проспективное исследование с участием 31 ребенка с stec-ГУС. Результаты. В результате проведенных исследований содержания ЭТ-1 в сыворотке крови пациентов с stec-ГУС в проспективной группе выявлено достоверное повышение его концентрации в острый период заболевания и перед выпиской по сравнению с данными контрольной группы (р<0,001), при обследовании через год высокие значения ЭТ-1 в сыворотке крови детей реконвалесцентов-ГУС сохранялись, что свидетельствует о сохраняющемся нарушении вазомоторной функции сосудистого эндотелия у детей с ГУС. Результаты определения содержания NO в сыворотке крови детей с stec-ГУС, напротив, показали снижение концентрации NO в острую стадию заболевания и перед выпиской по сравнению с контрольной группой (p<0,05). При обследовании детей реконвалесцентов-ГУС через 1 год выявлено повышение содержания NO в сыворотке крови. Выводы. Формирование хронической болезни почек (ХБП) после перенесенного stec-ГУС и ее прогрессирование сопровождаются достоверным повышением концентрации ЭТ-1 и снижением концентрации NO во всех исследуемых группах по сравнению с контрольной группой (р<0,05), что свидетельствует о нарушении вазомоторной функции эндотелия.

Ключевые слова

гемолитико-уремический синдром
острое повреждение почек
хроническая болезнь почек
эндотелин-1
оксид азота
эндотелиальная дисфункция

Введение

Гемолитико-уремический синдром (ГУС) является одной из важных причин острого повреждения почек (ОПП) у детей, характеризуется клинической триадой: микроангиопатической гемолитической анемией, тромбоцитопенией и ОПП. Риск прогрессирования почечной недостаточности вплоть до терминальной стадии у детей с ГУС чрезвычайно высок, особенно у детей раннего возраста. В развитии почечной патологии и особенно в возникновении осложнений при хронической болезни почек (ХБП) одну из главных ролей на сегодняшний день отводят нарушению функции эндотелия. Эндотелий – единый клеточный слой, обеспечивающий связь между циркулирующей кровью и сосудистой стенкой, регулирует важнейшие функции сосудистой стенки, включая тонус сосудов, коагуляцию и защиту от окислительного стресса и воспаления [1].

Эндотелин-1 (ЭТ-1) является важным регулятором объема гомеостаза в нормальных физиологических условиях и мощным вазоконстриктором при различных патологических процессах. Исследования, проведенные на животных моделях, показали, что ЭТ-1 влияет на сосуды почек как вазоконстриктор, участвует в ингибировании реабсорбции натрия и воды и приводит к клубочковому и канальциевому повреждению [2]. Экспрессия ЭТ-1 и его рецепторов повсеместно распространена во всех типах клеток почек [3]. Предполагается, что ЭТ-1 может повышать проницаемость клубочкового фильтрационного барьера за счет нарушения актинового цитоскелета в подоцитах [4, 5]. Кроме того, ЭТ-1 индуцирует апоптоз в почечных канальцах, что приводит к повреждению почек [6].

Эндотелий синтезирует и высвобождает оксид азота (NO), который образуется и является сосудорасширяющей и противовоспалительной сигнальной молекулой, играющей разнообразную роль в регуляции тонуса сосудов [7, 8]. Известно, что NO также играет важную роль в регулировании проницаемости сосудов, адгезии лейкоцитов и пролиферации гладкомышечных клеток [9].

Таким образом, анализ литературных данных демонстрирует центральную роль эндотелиальной дисфункции (ЭД) в многочисленных патофизиологических процессах, в т.ч. и при патологии почек. В данной статье рассматриваются показатели ЭД (ЭТ-1 и NO) в сыворотке крови детей с ГУС.

Цель исследования: определение клинико-диагностического и прогностического значения ЭТ-1 и NO в сыворотке крови у детей с ГУС.

Методы

Исследование выполнено в два этапа. На первом этапе исследования проведен ретроспективный анализ 89 историй болезни детей с типичной формой ГУС (stec-ГУС) в возрасте от 3 месяцев до 17 лет, находившихся на госпитализации в нефрологическом и реанимационном отделениях ГАУЗ ДРКБ МЗ РТ за период с 2004 по 2019 г.

У 43 (48,4%) пациентов развилась ХБП (ХБП 1-й стадии – 23 пациента, ХБП 3-й стадии – 16 детей, ХБП 5-й стадии – 4 ребенка).

Второй этап включил проспективное исследование с участием 31 ребенка с stec-ГУС, госпитализированного в ГАУЗ «ДРКБ МЗ РТ», Казань, с 2019 по 2022 г. Обследованные пациенты в проспективной группе также были разделены на две группы в зависимости от наличия ХБП и без ХБП. Распределение 11 (35,4%) детей с развившейся ХБП по стадиям было следующим: ХБП 1-й стадии – 4 детей, ХБП 2-й стадии – 5 детей, ХБП 3-й стадии – 2 пациента с ГУС.

Специальные методы исследования включили определение содержания ЭТ-1 в сыворотке крови методом иммуноферментного твердофазного анализа (ИФА) ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) с использованием наборов фирмы «Biomedica» (Австрия) и содержания NO в сыворотке крови с использованием набора Total Nitric Oxide and Nitrate/Nitrite Parameter Assay Kit фирмы RnD Systems (США) для количественного определения NO методом ИФА.

Контрольную группу составили 26 условно-здоровых ребенка, сопоставимых по возрасту и полу. От каждого пациента, включенного в исследование, и его родителей было получено информированное согласие. Проведение исследования одобрено Локальным этическим комитетом ФГБОУ «ВО Казанский ГМУ» Минздрава РФ.

Диагноз ГУС верифицировали в соответствии с клиническими рекомендациями диагностики и лечения ГУС у детей. Скорость клубочковой фильтрации (рСКФ) рассчитывали с использованием «bedside» формулы Шварца. Статистический анализ проводили с использованием программы StatTech v. 2.6.5 (ООО «Статтех», Россия).

Результаты

В результате проведенных исследований содержания ЭТ-1 в сыворотке крови пациентов с stec-ГУС в проспективной группе выявлено достоверное повышение его концентрации в острый период заболевания и перед выпиской по сравнению с данными контрольной группы (р<0,001), при обследовании через год высокие значения ЭТ-1 в сыворотке крови детей – реконвалесцентов-ГУС сохранялись, что свидетельствует о сохраняющемся нарушении вазомоторной функции сосудистого эндотелия у детей с ГУС. Результаты определения содержания NO в сыворотке крови детей с stec-ГУС, напротив, показали снижение концентрации NO в острую стадию заболевания и перед выпиской по сравнению с контрольной группой (p<0,05). При обследовании детей – реконвалесцентов-ГУС через 1 год выявлено повышение содержания NO в сыворотке крови (табл. 1).

223-2.jpg (245 KB)

Статистически значимое снижение показателя соотношения NO/ЭТ-1 в сыворотке крови детей с ГУС установлено в остром периоде заболевания и при обследовании детей перед выпиской (p<0,001). При сравнении содержания ЭТ-1 и NO в сыворотке крови детей с stec-ГУС в проспективной группе исследуемых в зависимости от исхода в ХБП выявлены статистически значимые различия (p<0,05) (табл. 2).

Результаты исследований показали, что у детей с ГУС с формированием ХБП значения ЭТ-1 и NO в сыворотке крови были статистически выше по сравнению с группой детей без формирования ХБП (p<0,05).

При определении содержания уровня ЭТ-1 в сыворотке крови пациентов с ХБП в зависимости от стадии выявлено достоверное повышение его содержания во всех исследуемых группах по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Максимальные значения ЭТ-1 в сыворотке крови отмечены у пациентов с V стадией ХБП (р<0,001). Сохраняющиеся высокие уровни ЭТ-1 в сыворотке крови детей с ГУС можно рассматривать в качестве одного из маркеров развития и прогрессирования ХБП (см. рисунок). В результате исследования содержания NO в сыворотке крови детей с ХБП на фоне stec-ГУС установлено постепенное снижение как концентрации NO, так и соотношения NO/ЭТ-1 по мере прогрессирования ХБП с минимальными значениями в V стадии (см. рисунок).

223-1.jpg (71 KB)

Проведена оценка прогностической значимости содержания ЭТ-1 в сыворотке крови детей с stec-ГУС для определения вероятности исхода в ХБП с помощью ROC-анализа. Площадь под ROC-кривой составила 0,975±0,056 с 95% ДИ: 0,865–1,000. Пороговое значение ЭТ-1 в сыворотке крови в точке cut-off составило 0,940 пмоль/мл.

Развитие ХБП прогнозировалось при значении ЭТ-1 в сыворотке крови выше данной величины или равном ей. Чувствительность и специфичность модели составили 80,0 и 100,0% соответственно.

Таким образом, проведенные исследования показали, что отличительной чертой ЭД у детей с ГУС является снижение синтеза NO и повышение продукции ЭТ-1 по мере прогрессирования стадии ХБП [10, 11].

Наиболее значимая корреляционная связь уровня ЭТ-1 в сыворотке крови у детей с stec-ГУС выявлена с уровнем креатинина и показателями СКФ. Более точно зависимость концентрации креатинина в сыворотке крови от показателя ЭТ-1 в сыворотке крови детей с ГУС описывалась с использованием метода парной линейной регрессии. Так, зависимость содержания креатинина от ЭТ-1 в сыворотке крови описывается следующим уравнением регрессии:

Yкреатинин=258,535×XЭТ-1-18,927,

где Yкреатинин – содержание креатинина в сыворотке крови (в мкмоль/л), XЭТ-1 – концентрация ЭТ- 1 в сыворотке крови (пмоль/мл).

При увеличении показателя ЭТ-1 на 0,1 пмоль/мл следует ожидать увеличения содержания креатинина в сыворотке крови на 25,85 мкмоль/л. Полученная модель объясняет 52,2% наблюдаемой дисперсии показателя креатинина в сыворотке крови.

Использование метода парной линейной регрессии позволило выявить зависимость СКФ от концентрации ЭТ-1 в сыворотке крови. Так, зависимость СКФ от ЭТ-1 описывается следующим уравнением регрессии:

YСКФ=-119,869×XЭТ-1+157,91,

где YСКФ – СКФ (мл/мин/1,73 м2), XЭТ-1 – содержание ЭТ-1 в сыворотке крови детей с ГУС (пмоль/мл).

При увеличении показателя ЭТ-1 на 0,1 пмоль/мл следует ожидать уменьшения СКФ на 11,98 мл/мин/1,73 м2. Полученная модель объясняет 30,9% наблюдаемой дисперсии показателя СКФ.

Обсуждение

В результате проведенных исследований было выявлено, что для детей с ГУС характерно изменение баланса между продукцией вазоактивных веществ, которые участвуют в регуляции тонуса сосудов. Изменение баланса характеризуется сниженной продукцией NO и повышенной активностью ЭТ-1 в сыворотке крови детей в остром периоде ГУС, оказывая влияние на пролиферацию гладкомышечных клеток сосудов, воспаление и функцию тромбоцитов. Высокие значения ЭТ-1 в остром периоде ГУС и через 1 год были связаны с повышенным риском развития ХБП у детей с ГУС.

Возможно, что изменения в концентрации ЭТ-1 в сыворотке крови могут свидетельствовать о прогрессировании повреждения почек из-за повышения продукции ЭТ-1 и активации рецепторов ЭТ-1 в условиях продолжающегося повреждения почек. Другой вероятный механизм, с помощью которого ЭТ-1 способствует прогрессированию почечной патологии, связан с основной ролью ЭТ-1 как вазоконстриктора, что приводит к ригидности артерий и гипертонии [12, 13].

Установлено, что ЭД прогрессирует с ранних стадий ХБП и постепенным нарастанием по мере прогрессирования стадий ХБП. Сохраняющийся дисбаланс вазоактивных веществ у детей с ГУС приводит к компенсаторной дезадаптации эндотелия, гиперпродукции фактора роста эндотелия сосудов и функциональному истощению его регенеративной способности, что способствует прогрессированию почечной недостаточности [13].

Высокие концентрации ЭТ-1 в сыворотке крови могут отражать снижение почечного клиренса, что подтверждается наличием обратной корреляции между ЭТ-1 и СКФ у детей с ГУС. Полученные нами данные наличия связи ЭТ-1 и NO в сыворотке крови с показателями тяжести нарушения функции почек подтверждают развитие и прогрессирование ХБП у детей с сохраняющимися признаками ЭД.

Выводы

Формирование ХБП после перенесенного stec-ГУС и ее прогрессирование сопровождаются достоверным повышением концентрации ЭТ-1 и снижением концентрации NO во всех исследуемых группах по сравнению с контрольной группой (р<0,05), что свидетельствует о нарушении вазомоторной функции эндотелия.

По мере прогрессирования стадий ХБП у пациентов после перенесенного stec-ГУС отмечалось повышение уровня ЭТ-1 в сыворотке крови, постепенное снижение как концентрации NO, так и соотношения NO/ЭТ-1 с минимальными значениями в V стадии, что демонстрирует прогностическое значение вазоконстрикции на всех этапах формирования нефросклероза.

Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки.

Список литературы

1. Labonte J., Bkaily G., D'Orleans-Juste P. Endothelin-B-receptors-dependent-inhibition of platelet aggregation in the CD-1 mouse. J Cardiovasc Pharmacol. 2000;34(1):184–86. Doi: 10.1097/00005344-200036051-00056.

2. Rebholz C.M., Harman J.L., Grams M.E., et al. Association between Endothelin-1 Levels and Kidney Disease among Blacks. J Am Soc Nephrol. 2017;28(11):3337–44. Doi: 10.1681/ASN.2016111236.

3. Kohan D.E. Role of collecting duct endothelin in control of renal function and blood pressure. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2013;305(7):659–68. Doi: 10.1152/ajpregu.00345.2013.

4. Saleh M.A., Boesen E.I., Pollock J.S., et al. Endothelin-1 increases glomerular permeability and inflammation independent of blood pressure in the rat. Hypertension. 2010;56(5):942–49. Doi: 10.1161/HYPERTENSIONAHA.110.156570.

5. Jin J., Sison K., Li C., et al. Soluble FLT1 binds lipid microdomains in podocytes to control cell morphology and glomerular barrier function. Cell. 2012;151(2):384–99. Doi: 10.1016/j.cell.2012.08.037.

6. De Miguel C., Pollock D.M., Pollock J.S. Endothelium-derived ET-1 and the development of renal injury. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2015;309:R1071–73. Doi: 10.1152/ajpregu.00142.2015.

7. Ignarro L.J., Buga G.M., Wood K.S., et al. Endothelium-derived relaxing factor produced and released from artery and vein is nitric oxide. Proc Natl Acad Sci.1987;84(24):9265–69. Doi: 10.1073/pnas.84.24.9265.

8. Cyr A.R., Huckaby L.V., Shiva S.S., Zuckerbraun B.S. Nitric Oxide and Endothelial Dysfunction. Crit Care Clin. 2020;36(2):307–21. Doi: 10.1016/j.ccc.2019.12.009.

9. Martens C.R., Edwards D.G. Peripheral vascular dysfunction in chronic kidney disease. Cardiol Res Pract. 2011;2011:1–9. Doi: 10.4061/2011/267257.

10. Schmidt R.J., Baylis C. Total nitric oxide production is low in patients with chronic renal disease. Kidney Int. 2000;58(3):1261–66. Doi: 10.1046/j.1523-1755.2000.00281.x.

11. Schmidt R.J., Yokota S., Tracy T.S., et al. Nitric oxide production is low in end-stage renal disease patients on peritoneal dialysis. Am J Physiol-Ren Physiol. 1999;276(5):F794–97. Doi: 10.1152/ajprenal.1999.276.5.F794.

12. Bohm F., Pernow J. The importance of endothelin-1 for vascular dysfunction in cardiovascular disease. Cardiovasc Res. 2007;76(1):8–18. Doi: 10.1016/j.cardiores.2007.06.004.

13. Catar R., Moll G., Kamhieh-Milz J., et al. Expanded Hemodialysis Therapy Ameliorates Uremia-Induced Systemic Microinflammation and Endothelial Dysfunction by Modulating VEGF, TNF-α and AP-1 Signaling. Front Immunol. 2021;12:774052. Doi: 10.3389/fimmu.2021.774052.

Об авторах / Для корреспонденции

Автор для связи: Макарова Тамара Петровна, д.м.н., профессор кафедры госпитальной педиатрии, Казанский государственный медицинский университет, Казань, Россия; makarova-kgmu@mail.ru

ORCID: 
Т.П. Макарова (T.P. Makarova), https://orcid.org/0000-0002-5722-8490 
Л.А. Давлиева (L.A. Davlieva), https://orcid.org/0000-0002-9816-1309  
Ю.С. Мельникова (Yu.S. Melnikova), https://orcid.org/0000-0001-6633-6381  

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.